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    細胞核的分離

    發布者:北京時代北利離心機有限公司 發布日期:2018-8-22 14:07:40

       研究細胞核及其組成成分,如染色質、DNA、核內小RNA以及各種復制和轉錄酶等,需分離制備細胞核。
        真核細胞的細胞核為有膜細胞器,所分離的細胞核要保持核膜的完整性,核內成分不外漏,核外細胞質成分不內滲或敖附在核膜上。通常用于分離細胞核的方法有3種,即有機溶劑法、蔗糖法和檸檬酸法。有機溶劑能阻止細胞質的某些成分進入細胞核內,但不能保持細胞核的正常形態,且可導致核內一些酶的失活,常用于定量分析細胞核的生化成分及其他一些特殊目的。蔗糖高速離心法較簡單,適用面廣,核純度高,保持生物活性,但要用高速離心機和較大量的蔗糖。檸檬酸法屬差速離心法,只需低速離心機,細胞質成分污染程度低,核破碎率也較低,蔗糖用雖較小,應用廣泛。
        一、蔗糖高速離心法
        將組織勻漿中細胞核游離出來,再經過蔗糖密度梯度離心,將細胞核沉淀下來。蔗糖為低滲透壓介質,能防止細胞核自溶。在梯度液中含有Ca2+,能減少細胞核的脆性。
        二、檸檬酸低速離心法
        取組織在一定濃度的檸檬酸溶液中勻漿,通過差速離心將沉降系數較大的細胞核先沉淀下來。檸檬酸能除去紉胞質里的酸溶性蛋白,整合二價陽離子,抑制核酸酶,減少校的破碎。

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