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    如何利用高速冷凍離心機去培養管分離細胞膜

    發布者:北京高速離心機 發布日期:2018-7-27 11:17:32

     50 ml 離心管在離心時的最高轉速都低于12000rpm,赫西儀器出產的3H系列高速冷凍離心機特別配置了新型的專用于組織培養管的高速轉頭,并專門定制了高強度的50ml 錐底管。用這種轉頭分離細胞器,離心時間短,分離效果好。

    設備:3H系列高速冷凍離心機,6×50ml高速轉頭, 50 ml 離心管

    操作步驟:

    1.成年鼠肝勻漿2000xg(約4000rpm) 離心15分,4℃(6×50ml高速轉頭)

    2.沉淀用1mM NaHCO3 稀釋再在4000rpm離心15分,4℃

    3.沉淀按濕重1g/ml NaHCO3 稀釋后配成68%蔗糖液,置于離心管下部,上部用42%蔗糖液

    4.6×50ml高速轉頭,42200xg(18000rpm),4℃離心90分鐘,加速“5”減速“5”

    5.離心后,粗制細胞膜在42%與68%蔗糖液之間形成

    6.粗制細胞膜吸出后,用1mM NaHCO3 稀釋后,再以2000xg(約4000rpm)4℃離心30分,重復二次

    7.去除上清液沉淀,再用1mM NaHCO3 稀釋,在50ml 離心管中,從底部依次向上鋪設:68%蔗糖液(稀釋樣品配成)、48%蔗糖液、42%蔗糖液。

    8.鋪好后再次離心,6×50ml高速轉頭,18000rpm,4℃,90分鐘,加速“5”減速“5”

    9.離心結束后可以看出細胞膜分布在42%與48%蔗糖液之間

    成果:階梯形蔗糖梯度在50ml 離心管中用高速冷凍離心機分離亞細胞構造(膜、線粒體、溶酶體、高爾基復合體、微體等),由于開發了高強度的組培養管而變得更為可行。

    通過上例,我們可以選擇不同的蔗糖階梯度來分離細胞器,可以得到相當高的純度。除了蔗糖梯度以外,用Percoll及Nycodenz 的自形成、予形成或階梯梯度分離亞細胞構造,近年來被廣泛應用。

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