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    北京時代北利臺式低溫高速離心機如何提取與制備蛋白質

    發布者:北京時代北利離心機有限公司 發布日期:2018-7-27 17:36:43

     臺式低溫高速離心機是實驗室最常見的必備儀器,今天由上海趙迪技術人員向大家介紹臺式低溫高速離心機如何提取與制備蛋白質。
      
      蛋白質樣品制備
      
      秧苗蛋白質樣品的提取按Davermal等(1986)的方法進行。
      
      100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5ml10%三氯乙酸(丙酮配制,含10mM即0.07%β-巰基乙醇),混勻,-20℃沉淀1小時,4℃,15000r/min離心15min,棄上清,沉淀復溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巰基乙醇),再于-20℃沉淀1小時,同上離心棄上清,(有必要再用80%丙酮(含10mMβ-巰基乙醇所得沉淀低溫冷凍真空抽干。
      
      按每mg干粉加入20μl(可調)UKS液[9.5M尿素,5mM碳酸鉀,1.25%SDS,0.5%DTT(二硫蘇糖醇),2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc,pH3.5-10),6%TritonX-100],37℃溫育30min,期間攪動幾次,28度(溫度低,高濃度的尿素會讓溶液結冰)16000r/min離心15min,離心力越大時間長一點越好!上清即可上樣電泳;蛘-70度保存
      
      植物根中蛋白質的抽取
      
      (1)sample,液氮研磨
      
      (2)裝1.5mlcentrifuge用tube
      
      (3)加1MKH2PO4K2HPO4700ul
      
      (4)12000rpm,4度,10-15minite
      
      (5)取上層液,蛋白質就在里面

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